Химические компоненты Копеечника — Hedysarum

Род Копеечник (Hedysarum) относится к семейству бобовых (Fabaceae). Из 285 видов данного растения только 40 подвергались фитохимическим исследованиям. Химические компоненты, найденные в копеечниках, включают изопреноиды, алкалоиды, аминокислоты, сапонины, дубильные вещества, полифенольные соединения, витамины и др. [1,2]. Идентификацию других классов соединений (сапонинов, кумаринов, дубильных веществ и др.) проводили с помощью качественных реакций [3]. Сравнительно недавно (2007г.) китайскими исследователями были обнаружены 4 новых производных пренилизофлавонойдов: 5-гидрокси-4-метокси-8-пренил-2-гидроксиизопропилдигидропирано [4,5:6,7]-изофлавон; 5-гидрокси-4-метокси-6-пренил-2-гидроксиизопропилдигидропирано [4,5:8,7]-изофлавон;5-гидрокси-4-метокси-8-пренил-1,2-пероксил-3,3-диметилдигидропирано[5,6:6,7]-изофлавон и 5-гидрокси-4-метокси-6-пренил-1,2-пероксил-3,3-диметилдигидропирано[5,6:8,7]- изофлавон [4]. В настоящее время в литературе мало данных по исследованию фитохимического состава копеечников в России.

Целью исследования является сравнительное изучение фитохимического состава водно-спиртовых фитопрепаратов (ФП), полученных из корней видов копеечника (H. negletum – копеечник забытый; H. theinum – копеечник чайный; H. alpinum – копеечник альпийский) методом фитохимического скрининга и тонкослойной хроматографии.

 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Использовали ФП из различных видов копеечника (H. theinum, H. alpinum, H. neglectum), капли «Красный корень» (фирма Эвалар, г.Бийск), а также ключевые пиковые фракции, полученные после хроматографирования. Хроматографирование проводили в режиме гельпроникающей хроматографии на стеклянной хроматографической колонке (0,5 х 80 «Pharmacia», Швеция), наполненной 7-8мл. сефарозы CL-4В («Pharmacia», Швеция) [5]. Реакции фитохимического скрининга проводили известными способами [6]. Реактивы и реагенты имели квалификацию «х.ч.» и  «ч.д.а.». Пластины, применяемые для тонкослойной хроматографии, имели марку «Сорбфилл» (Россия).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Полученные экспериментальные данные по общему фитохимическому скринингу исследуемых ФП  представлены в таблице 1. По предварительным нашим данным ключевым типом биологически активных веществ у исследованных ФП являются конденсированные танины (положительная желатиновая проба, реакции с 1% раствором ванилина, антипирином и др.) [5]. Также показано наличие других фенольных соединений: ксантонов, флавоноидов (реакция с берлинской лазурью, борной и щавелевой кислотами), возможно присутствие тритерпеновых сапонинов (реакция с ацетатом свинца, солями меди) [6]. Идентификация фитостероидов была проведена реакциями с n-хлорбензальдегидом и концентрированной серной кислотой (см. табл. 1).

Таблица 1. – Фитохимический скрининг основных типов БАВ в исследуемых ФП.

               фп

 

реакции

Настойка копеечника забытого Настойка копеечника чайного Настойка «Красный корень» Настойка травы копеечника альпийского
1. Реакция с FeCl3 +

Черно-зеленое окрашивание, со временем мутнеет

+

Черно-зеленое окрашивание

+

Зеленовато-бурое окрашивание, зеленовато-коричневый осадок

+

Темно-зеленое окрашивание, переходящее в черно-зеленое окрашивание

2. Реакция азосочета-ния +

Красновато-оранжевое окрашивание

+

Желто-оранжевое окрашивание

+

Красновато-бурое окрашивание, переходящее в темно-красно-бурое

+

Красновато-оранжевое окрашивание

3. Желатино-вая проба +

Мутный осадок

+

Мутный осадок

+

Мутный осадок

 

 

4. Цианиди-новая проба  

 

 

 

 

5. Реакция с

1% р-ом

ванилина

+

Оранжево-

коричневый осадок

+

Ярко жёлтое окрашивание, красно-оранже-вый осадок

+

Кирпично-

красный осадок

+

Коричневый осадок

6. Реакция с

борной и щавелевой

кислотами

+

Белый осадок

+

Оранжевый

осадок

+

Кирпично-

красный осадок

+

Коричневый осадок

7. Реакция

с антипири-ном

+

Бежевый

осадок

+

Красно-

коричневое окрашивание

+

Красно-коричневое окра-шивание

+

Зеленовато-

коричневый

осадок

8. Реакция с

ацетатом свинца

+

Коричневый осадок

+

Красно-

бурый осадок

+

Красно-коричне-

вый осадок

 

+

Желтовато-

зелёный

осадок

9. Реакция с

берлинской

лазурью

+

Синий

осадок

+

Сине-зелёный

осадок

+

Тёмно-красно-коричневый

осадок

+

Синий

осадок

10. Реакция с CuSO4

 

+

Травянисто-зелёное окрашивание, коричневый осалок

+

Травянисто-зелёное окрашивание, коричневый осалок

+

Коричне-

вый осадок

 

+

Желто-зеленое окрашивание

11. Реакция с CuSO4 / HCL

 

+

Травянисто-зелёное окрашивание, коричневый осалок

+

Травянисто-зелёное окрашивание, коричневый осалок

+

Коричневый осадок

 

+

Бледно-коричневое окрашивание

12. Реакция с n-хлорбен-зальдеги-дом

 

+

Желто-коричневое окрашивание

+

Желто-коричневое окрашивание

+

Коричнево – бурый осадок

 

+

Желтовато-

зелёное  окрашивание

 

13. Реакция с H2SO4 (конц.)

 

+

Коричнево – бурый осадок

 

+

Коричнево – бурый осадок

 

+

Коричнево – бурый осадок

 

+

Лимонно-желтое окрашивание

Интересно, что фитостероиды были идентифицированы нами методом ГЖХ-МС [7]. Также были исследованы ключевые пиковые  фракции (I и III) настоек [5]. По результатам фитохимического анализа можно предположить наличие в I ключевом пике полисахаридов, а в III ключевом пике – конденсированных танинов (см. табл. 2).

Ключевой пик II  по нашим данным, можно считать минорным [5], для более детального анализа необходимо его накопление. Это планируется сделать в дальнейшем.

Таблица 2. – Фитохимический скрининг основных типов БАВ в исследуемых хроматографических пиковых фракциях.

         Реактив

 

Фракция

α-нафтолсерная кислота Резорцин, HCL конц. Cu(OH)2 FeCL3 1% раствор желатины
I пик ФП №1 +

красно-фиолетовое окрашивание

+

фиолетовое окрашивание

+

кирпично-красный осадок

 

 

III пик ФП №1  

 

 

 

+

черно-зеленое окрашивание

 

+–

слабая муть

I пик ФП №2 +

бледно-фиолетовое окрашивание

+

сиреневое окрашивание

+

кирпично-красный осадок

 

 

III пик ФП №2  

 

 

 

 

 

+

черно-зеленое окрашивание

+–

слабая муть

I пик ФП №3 +

красно-фиолетовое окрашивание

+

фиолетовое окрашивание

+

коричнево-красный осадок

 

 

III пик ФП №3  

 

 

+

черно-зеленое окрашивание

+–

слабая муть

I пик ФП №4 +

красно-фиолетовое окрашивание

+

грязно-фиолетовое окрашивание

+

красновато-оранжевый осадок

 

 

 

 

 

III пик ФП №4  

 

 

+

черно-зеленое окрашивание

+–

слабая муть

ФП № 1 – настойка копеечника забытого; ФП № 2 — настойка копеечника чайного; ФП № 3 – капли «Красный корень» (Эвалар, г.Бийск); ФП № 4 – настойка копеечника альпийского.

Выделение ключевых БАВ проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) (см. табл. 3).

Таблица 3. – ТСХ изученных ФП

 

ФП

1.Окрашивание пятен проявителем

2.Окрашивание в УФ-свете

 

Rf

Окрашивание в УФ-свете

после обработки реактивом

20% H2SO4 CuSO4 /HCL FeCL3
Настойка

копеечника забытого

1.пятна коричневого цвета

2.пятна фиолетового цвета

Rf1 = 0,15

Rf2 = 0,6

Rf3 = 0,7

пятна зеленого цвета пятна зеленого цвета пятна желто-коричневого цвета
Настойка

копеечника чайного

1.пятна коричневого цвета

2.пятна фиолетового цвета

Rf1 = 0,07

Rf2 = 0,58

Rf3 = 0,7

пятна зеленого цвета пятна зеленого цвета пятна желто-коричневого цвета
Настойка

«Красный корень»

1.пятна коричневого цвета

2.пятна розовато–

фиолетового цвета

Rf1 = 0,07

Rf2 = 0,5

Rf3 = 0,7

пятна зеленого цвета пятна зеленого цвета пятна коричневого цвета

Система растворителей n-бутанол—этанол—вода (13:7:2), реактивы обнаружения: 20% раствор H2SO4, CuSO4 /HCL, FeCL3

Аналогичный результат был получен в системе хлороформ—метанол—вода (13:7:2).

Таким образом, полученные данные ТСХ показали наличие в ФП как высокомолекулярных полифенолов (Rf < 0,3), так и низкомолекулярных соединений фенольного характера (Rf > 0,3) [8]. Возможно также наличие стероидных сапонинов (пятна зеленого цвета в УФ-свете) (см. табл. 3).