Свойства тромбоцитарного концентрата in vitro полученного в результате афереза на аппарате Trima при хранении в плазме и растворе T-Sol

Цель: Исследовать результаты хранения тромбоцитарной массы (ТМ) стандартной концентрации и гиперконцентрированной, полученной на новой версии автоматического аппарата заготовки компонентов крови Trima.

Предмет исследования: заготовленные 6 образцов гиперконцентрированной ТМ (3000*10Е3/мкл — 5*10Е11)и 6 образцов ТМ обычной концентрации (1500*10Е3/мкл – 5*10Е11).

Материалы и методы: В образцы с гиперконцентрированной ТМ было добавлено 300 мл раствора T-sol в течение часа после забора. Затем гиперконцентрированная ТМ разделена на 2 пакета. Образцы перевезены для хранения и исследования в течение 7 дней (21±2оС, горизонтальное положение, ежесекундное помешивание в контейнерах Gambro ELP) на следующее утро после приготовления. Пробы забирались в асептических условиях на 1, 5 и 7 дни хранения.

Результаты:

  Гиперконцентрированная ТМ (n=5) Стандартная ТМ (n=5)
Объем (мл) 473±4 372±5
Концентрация (*10Е3/мл) 1072±96 1562±100
Количество тромбоцитов (*10Е11) 5,1±0,5 5,8±0,4

При хранении ТМ стандартной концентрации определяется более высокие pH, тромбокрит и морфологический коэффициент при меньшей экспрессии антигенов активации. По одному образцу каждой группы было исключено из исследования из-за превышения количества тромбоцитов, выявленное через сутки хранения.

День Тип Коэф.

вращения

Морфология % дискоидных CD62P

(%)

CD63

(%)

pH

(37C)

HSR

(%)

1 A 3.0±0.0 324±14 65±6 15.8±9.2 12.4±6.5 7.05±0.04 56±6
  B 2.9±0.2 310±22 62±8 2.9±1.1 6.9±2.3 7.12±0.04 85±4
5 A 2.5±0.0 287±18 50±7 23.7±8.0 24.0±8.6 6.92±0.07 57±8
  B 2.5±0.0 284±2 50±1 11.2±3.6 15.1±6.1 7.09±0.06 80±6
7 A 2.3±0.0 232±29 33±10 25.8±10.3 23.6±10.1 6.90±0.07 50±6
  B 2.0±0.0 274±8 48±3 14.2±3.4 15.8±4.4 6.98±0.08 81±2

A – гиперконцентрированная ТМ с раствором-T

B – стандартная ТМ

Ср. ±ст.откл. N=5

Заключение: Исследование in vitro свойств гиперконцентрированной ТМ с добавлением T-Sol при хранении в условиях исследования показали несущественно большую активацию по сравнению с ТМ стандартной концентрации. Гиперконцентрированная ТМ с добавлением T-Sol может храниться до 7 суток.

Доклад представлен на 25 конгрессе международного общества трансфузиологов (ISBT) 2002. Опубликована Vox Sanguinis, 2002; 83 (Suppl. 2): 85. Pub.Blackwell Science.Ltd.

In vitro исследование 42 суточного хранения эритромассы, приготовленной аппаратом Trima Accel, с добавлением AS-3.

Актуальность проблемы: До недавнего времени аппарат Trima использовал технологию двойной сепарации, как и аппарат Spectra. Внедрение одноэтапной сепарации и приготовления тромбоцитарной массы привело к большей эффективности. Данное исследование ставит перед собой цель выяснить, как влияет переход с двухэтапной на одноэтапную сепарацию, более эффективную для приготовления тромбоцитов, на приготовление эритромассы.

Материалы и методы исследования: С применением аппарата Trima Accel было приготовлено 13 двойных пакетов и 12 одинарных пакетов эритроцитарной массы с добавлением ACD-A от здоровых доноров. Эритроцитарная масса хранилась 42 суток в стандартных условиях банка крови. Исследовались концентрации аденозин-5`-трифосфат (АТФ), внеклеточные натрий, калий, глюкоза, выраженность гемолиза в образцах с 1 по 42 дни исследования. Для анализов применялись стандартные методы.

Результаты: Значимые данные результата 42 дневного хранения приведены в таблице.  Отмечен приемлемый уровень гемолиза, ниже установленного в США (менее 1,0%) и в Европе (менее 0,8%) стандартов для эритроцитарной массы. Концентрация АТФ, свидетельствующая о целостности мембран эритроцитов при хранении, соответствовала уровню гемолиза. Значения концентраций натрия и калия оказались приемлимыми. Уровень глюкозы продемонстрировал адекватное потребление из раствора и соответствовал падению АТФ.

Заключение: Образцы эритроцитарной массы, приготовленные аппаратом Trima, продемонстрировали in vitro параметры, свидетельствующие о качественном хранении в течение 42 дней.

Параметры эритроцитарной массы, приготовленной аппаратом Trima,
при 42 дневном хранении

  Начало хранения 42 день хранения
АТФ (мкмоль/г Hb) 3,84±0,53 2,70±0,57
% снижения АТФ 70±11
Свободный гемоглобин плазмы (мг/дл) 8,8±5,1 147,8±128,6
Гемолиз (%) 0,18±0,01 0,32±0,29
Натрий плазмы (мэкв/л) 162±4 123±11
Калий плазмы (мэкв/л) 2,4±0,4 47,7±8,6
Глюкоза плазмы (мг/дл) 491±15 259±42

Среднее значение±стандартное отклонение, количество образцов 38

Доклад представлен на 55 ежегодном съезде американской ассоциации банков крови (AABB) Октябрь 2002. Опубликована: Transfusion 2002; 42: 345.

Свойства тромбоцитарного концентрата
Свойства тромбоцитарного концентрата

Аппарат Trima. Повышение  эффективности приготовления тромбомассы как результат применения одноэтапной технологии сепарации и лейкоредукции LRS камерой.

Введение: Компания Гамбро внедрила технологию тромбоцитофереза более 20 лет назад. Первоначально, для тромбоцитофереза применялась высокоэффективная одноэтапная технология сепарации, однако при превышении примеси лейкоцитов более чем 108 существовал высокий риск трансфузионных осложнений. Для предотвращения этого осложнения, стала применяться менее эффективная двухэтапная технология сепарации, позволяющая добиться лейкоредукции. Позднее, лейкоредукция ниже 106 стала достигаться улучшенной проточной LRS-камерой. На сегодняшний день одноэтапная технология сепарации применяется совместно с LRS-камерой для создания высокоэффективной аппаратной платформы для получения лейкоредуцированной тромбоцитарной массы.

Метод: Тромбоцитарная масса была получена от здоровых обследованных доноров в 2 исследовательских центрах с помощью одноэтапной сепарации аппаратом Trima. Результаты были сравнены с продуктами, полученными при использовании 4 версии аппарата Trima с двухэтапной сепарацией.

Результаты: Результаты подсчета тромбоцитов и объемы циркулирующей крови в сравниваемых группах не отличались. Обработанные объемы крови, полученное количество тромбоцитов, время процедур приведены в таблице. Все полученные тромбомассы содержали мене 106 лейкоцитов. Логарифмический график нормализованной вероятности предсказывает 99% тромбомасс с содержанием лейкоцитов менее 106. Анализ биноминального распределения свидетельствует о 95% вероятности того, что 97% тромбомасс, приготовленных аппаратом Trima Accel будут содержать менее 106 лейкоцитов. В данном исследовании одноэптапная сепарация продемонстрировала большую скорость приготовления тромбоцитарной дозы при меньшем объеме обработанной крови. Эффективность забора тромбоцитов превышала 30% при заготовке более 1 тромбоцитарной дозы в Центре крови Восточного Висконсина (ЦКВВ) (США). Данные центра крови американского красного креста (ЦКАКК)  (Норфолк, США)  также показали, что аппарат Trima Accel повышает комфорт донора более медленным разгоном и обработкой меньшего объема крови, однако не продемонстрировали большей скорости сбора тромбоцитов. Увеличение скорости забора одной тромбоцитарной дозы было продемонстрировано в обоих центрах крови.

Заключение: Аппарат Trima Accel повышает эффективность приготовления одной лечебной дозы тромбоцитов, оцененную по объему обработанной крови, времени процедуры и скорости получения одной дозы по сравнению с 4 версией Trima. Эффективность лейкоредукции, осуществляемая аппаратом Trima Accel, соответствует стандартам, принятым в США и Европе.

  Объем обработанной крови (мл) Количество отобранных тромбоцитов (1011) Время процедуры Скорость выделения тромбоцитов (109/мин)
Trima, Версия 4
ЦКАКК. N=10 3499±831 3,7±0,5 48±7 7,7±1,3
ЦКВВ. 2802±454 1,0 58±17 6,6±2.2
Trima Accel
ЦКАКК. N=20 2968±532 3,9±1,0 48±11 8,5±2,6
ЦКВВ.62 3247±736 5,3±2,0 51±19 10,0±3,1

 

Доклад представлен на 55 ежегодном съезде американской ассоциации банков крови (AABB) Октябрь 2002. Опубликована: Transfusion 2002; 42: 375.

21 дневное хранение эритроцитарной массы, приготовленной на аппарате Trima, с использованием раствора ACDA

Цель: Раствор ACDA одобрен в США для 21 дневного хранения эритромассы. Была исследована возможность хранения эритромассы только в антикоагулянте (раствор ACDA), приготовленной аппаратом Trima.

Методы: Одинарные и двойные пакеты эритроцитарной массы, приготовленные аппаратом Trima с использованием в качестве антикоагулянта ACDA, хранились без добавления консервантов 21 дней. По 12 образцов были заготовлены в центре крови американского красного креста (ЦКАКК)  (Норфолк, США)  и в центре крови Ноксворт (ЦКН). Образцы исследовались после приготовления и на 21 день хранения. В качестве контроля послужили образцы эритроцитарной массы, полученные из цельной крови с антикоагулянтом ACDA.

Результаты: Основные результаты приведены в таблице.

  Объем мл Ht Hb плазмы мг/дл Гемолиз % АТФ % pH
День приготовления
ЦКАКК 242

(9)

74,1

(3,1)

32,9

(13,7)

0,02

(0,01)

7,0

(0,05)

ЦКН 244

(6)

76,1

(4,2)

51,7

(8,6)

0,02

(0,01)

7,0

(0,05)

День 21
ЦКАКК 78,7

(3,4)

350,6

(162,9)

0,19

(0,07)

63

(10)

6,6

(0,05)

ЦКН 76,8

(4,6)

401,2

(263,7)

0,13

(0,05)

71

(12)

6,6

(0,04)

В целом, различия между эритроцитарными массами, приготовленными из цельной крови и аппаратом Trima, статистически не достоверны. В случаях достоверной разницы, полученные значения допустимы для клинического применения. Значение гемолиза соответствует стандартам эритроцитарной массы для трансфузии, как США, так и Европы. Уровни гемолиза и АТФ свидетельствуют о хорошей целостности мембран эритроцитов. Значимые отличия получены при сравнении с образцами 42 дневного хранения с добавлением консерванта AS-3 в итоговом объеме и гематокрите (данные не представлены). Уровень гемолиза при 21 дневном хранении в ЦКН меньше ранее полученных результатов 42 дневного хранения эртроцитарной массы, полученной на аппарате Trma, с добавлением AS-3. (0,19±0,07% против 0,30±0,15%).

Заключение:  Полученные результаты свидетельствуют о хорошем качестве эритроцитарной массы, полученной на аппарате Trima, для трансфузии пациентам с анемией. Эритроцитарные массы соответствуют стандартам США и Европы. Результаты соответствуют ранее полученным данным для 42 дневного хранения эритроцитарной массы, полученной на аппарате Trima, с добавлением раствора AS-3.

Доклад представлен на 23 ежегодном съезде американского общества афереза (ASFA), Июнь 2002. Опубликован Clinical Aphereses 2002; 42(95): 53.

Применение автоматизированной системы приготовления компонентов крови Trima Accel для получения гиперконцентрированных тромбомассы.

Мы исследовали возможность аппарата Trima Accel заготавливать гиперконцентрированную тромбомассу (ГКТ) от  здоровых добровольных доноров. Так же мы определяли уровень лейкоредукции при этих условиях. В городском центре крови получено и исследовано 20 образцов ГКТ от доноров, соответствующих требованиям центра при процедурах афереза. Заданная концентрация тромбоцитов составила 3857*10Е3/мкл, количество тромбоцитов колебалось от 3,5*10Е11 до 6,3*10Е11 в зависимости от введенных параметров донора. Диапазон концентрации тромбоцитов составил от 3274*10Е3/мкл до 4215*10Е3/мкл. Среднее количество тромбоцитов – 4,0*10Е11 при стандартном отклонении 0,5*10Е11, при коэффициенте вариации 13,2% для образцов достигших заданную концентрацию (n=13). Среднее количество тромбоцитов составило 7,4 *10Е11 при стандартном отклонении 0,5*10Е11 и коэффициенте вариации 6,2% для образцов свыше 6,3*10Е11 (n=7). Концентрация лейкоцитов считалась в камере Нагеотте. Все исследованные образцы  (n=12) содержали менее 1,0*10Е6 лейкоцитов со средним количеством примеси лейкоцитов 2,1*10Е5 в образце. Данные регрессивного анализа свидетельствуют о превышении 95 кумулятивной вероятности, что ГКТ будут содержать менее 1,0*10Е6 примеси лейкоцитов. Что соответствует требованиям, предъявляемым к тромбоцитарной массе.